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弥漫大B细胞淋巴瘤患者FcγRIIIa基因多态性对利妥昔单抗疗效的影

归档日期:04-19       文本归类:多态性      文章编辑:爱尚语录

  (diffuselarge B- cell lymphoma, DLBCL)是一组在组织形态、免疫表型、基因特征和临床生物学行为等方面具有很强异质性的恶性肿瘤。肿瘤细胞表达CD20,为利妥昔单抗(RTX)的应用提供了理论依据,LNH98-5/MInT两项大规模临床研究确立了RTX在DLBCL—线治疗中的地位。RTX通过其Fc段与NK细胞、巨噬细胞、单核细胞等效应细胞表面的Fc受体(FcyR)结合发挥作用。以往的研究表明FcγR编码基因具有多态性,其中FcyRIlia基因多态性可影响FcγRIIIa基因与RTX的亲和力进而影响RTX的疗效。在本研究中我们采用PCR联合测序法检测FcγRIIIa基因多态性在DLBCL患者及健康人群中的分布,旨在了解FcγRIIIa基因多态性对接受含RTX的免疫化学治疗的DLBCL患者疗效及预后的影响。

  1、病例:纳入2007年10月至2011年12月在南京医科大学第一附属医院及附属无锡人民医院初诊住院治疗的122例DLBCL患者,其中男73例,女49例,中位年龄52(23~79)岁。所有患者均经组织病理学检查明确诊断。临床分期根据Ann-Arbor分期方法,I、II、III、IV期分別为10例(8.20%)、43例(35.25% )、57例(46.71%)及12例(9.84%),健康对照为100名来自无锡人民医院体检中心的健康体检者,其中男62名,女38名,中位年龄49(20~79)岁。以上研究对象均为无亲缘关系的中国汉族人,并经本人知情同意。

  2、主要试剂和仪器:DNA提取试剂盒购自德国 QIAGEN公司,引物由上海英骏生物技术有限公司合成,PCR试剂盒购自天根生化科技(北京)有限公司,PCR仪及Gel-doc 1000成像分析系统为美国Blo-RAD公司产品,PCR产物送上海华津生物科技有限公司测序。

  4,治疗方案:所有患者接受8(4~12)个疗程含RTX的治疗方案化疗,其中112例采用一线方案,包括R-CHOP(RTX、环磷酰胺阿霉素长春新碱泼尼松)和R-DA-EPOCH方案(RTX、依托泊苷、泼尼松、长春新碱、环磷酰胺和阿霉素);7例采用二线方案,包括R-DHAP(RTX、地塞米松、大剂量阿糖胞苷和顺鉑)、R-Hyper-CVAD+ HD MTX/Ara-C(RTX、环磷酰胺、长春新碱、阿霉素、地塞米松+交替大剂量甲氨蝶呤、阿糖胞苷)、R-GemOx(RTX、吉西他滨、异环磷酰胺和奥沙利鉑)、R-ICE(RTX、异环磷酰胺、卡铂、依托泊苷)、R-MINE(RTX、美司钠、异环磷酰胺、米托蒽醌、依托泊苷)、R-GDP(RTX、吉西他滨、地塞米松、顺铂)方案;还有3例患者采用含有硼替佐米的方案。35例患者接受大剂量化疗+自体造血干细胞移植术。

  5、疗效判断标准:疗效评估在第3个和第6个疗程完成后进行。完全缓解(CR)、部分缓解(PR)、疾病稳定(SD)和疾病进展(PD)根据国际淋巴瘤工作组标准进行疗效判断。总缓解率(ORR)为CR和PR率之和。

  6、随访:所有病例均随访至2012年12月,中位随访时间为35(12~62)个月。无进展生存(PFS)指患者从诊断确立到淋巴瘤复发或病情恶化。总生存(OS)从患者诊断确立开始计算,到淋巴瘤引起的死亡或随访终点。患者治疗结束后每3个月进行肿瘤状态、长期毒性和行为状态的评估。

  7、统计学处理:所有数据采用SPSS 17.0软件进行统计学分析。差异性检验采用X2检验,生存分析采用Kaplan-Meier方法,P0.05为差异有统计学意义。

  1、FcγR基因多态性:PCR扩增目的片段经电泳、染色成像后观察并测序。FcγRllla目的片段长度为384bp。FcγRllIa基因的第559位单个核苷酸由G到T的变异导致其编码的158位氨基酸由缬氨酸(V)转变为苯丙氨酸(F)(图1)。

  3、DLBCL患者FcγRllla各基因型与临床特征的相关性分析:122例患者临床特征详见表2,经X2检验,FcγR IIIa各基因型分布与患者的性別、年龄、 Ann-Arbor分期、免疫分型、LDH水平及IPI评分均无相关性(P值均0.05)。

  近20年来,随着化疗方案的不断完善、靶向药物的应用和造血干细胞移植的开展,DLBCL患者的疗效及预后有了很大的提局和改善。RTX是一种人/鼠嵌合型抗CD20的单克隆抗体,能特异性地与B淋巴细胞上的CD20抗原结合,引发B细胞溶解。自1997年被美国食品与药品管理局批准用于治疗复发难治惰性淋巴瘤以来,RTX已被广泛应用于CD20阳性B细胞淋巴瘤的治疗,成为治疗该类疾病的重要药物。

  FcγRs基因定位于人类染色体lq21-24,属于免疫球蛋白超家族成员,系lg Fc段的特异性受体。FcγRs与IgGFc段结合,引发多种免疫反应,如介导抗体依赖性细胞的细胞毒性(antibody-dependent cellular cytotoxicity,ADCC)、调理吞唾、抗原递呈以及释放炎症因子等,在维持机体免疫及免疫耐受中起重要作用。但临床治疗过程中发现并非所有的CD20+B细胞淋巴瘤患者均对RTX有效,深入研究其中的机制对更好地提高RTX的疗效具有重要意义。个体的遗传差异通常是造成个体间药物疗效不同的重要原因。有些单核苷酸多态性(singlenucleotide polymorphism, SNP)位点会影响编码基因的结构与功能,改变对某些疾病的易感性或对某些药物的反应。研究表明FcγRIIIa基因的第559位单个核苷酸由G到T的变异导致其编码的第158位氨基酸由缬氨酸(V)转变为苯丙氨酸(F),V比F具有更高的亲和力,可影响FcγRs与RTX的亲和力进而影响RTX的疗效。

  2002年Cartron等对49例接受RTX单药治疗的初治滤泡淋巴瘤(follicular lymphoma,FL)患者进行FcγRII a、FcγRIII a基因多态性分析,发现RTX治疗2个月时V/V型、V/F和F/F型患者的ORR分別为90%、59%和45%,V/V型与另外两种基因型患者之间的ORR差异有统计学意义(P=0.030),首次在FL患者中发现FcγRIII a基因多态性与RTX临床疗效有相关性。此后有多项研究报道FcγRs基因多态性在免疫化疗中对患者疗效及预后的影响。也有学者得到不同的结论,认为FcγRIIa、 FcγR IIIa及 FcγR IIb基因多态性与患者的疗效和预后无关。这可能与样本量、病理类型、种族、治疗方案及疗效判断标准不完全一致有关。在本研究中,我们的研究结果显示FcγRIIIa基因V/V及V/F型DLBCL患者的CR率及ORR相近,且明显优于F/F型者(P值均0.05);前两者的3年PFS及OS率相近,且明显优于后者(P值均0.05)。

  我们对近年报道的几项较大规模研究中不同病理类型淋巴瘤患者FcγRllla基因多态性的分布情况、疗效及预后进行了汇总(表3)。在两组关于DLBCL的研究中,Kim等认为FcγRllla基因多态性与患者接受R-CHOP方案的疗效有关,但与预后缺乏相关性;而Ahlgrimm等人为FcγRllla基因多态性与患者接受R-CHO方案的疗效无关,但与预后相关。我们和上述的研究结果不尽相同,除种族及遗传背景因素影响外,Kim等的治疗方案包含有放射治疗,而Ahlgrimm等的研究对象均为65岁的高龄患者,这些因素也可能导致不同的结果。

  我们的研究结果显示FcγRs各基因型在DLBCL患者和健康人群中的分布差异无统计学意义(P值均0.05)。与既往的研究比较,本研究中V/V基因型患者的比例较低,这可能与总样本量小、病理类型不同、种族及遗传背景差异有关。

  Weng等已经证实,由FcγRs介导的ADCC是 RTX联合化疗方案的重要作用机制之一:①V/V、V/F基因型与RTX亲和力增加,影响RTX的药代动力学,增进RTX的疗效;②RTX通过FcγRllla与NK细胞结合后导致颗粒酶释放可激活caspase,从而克服淋巴瘤细胞的耐药性;③V/V、V/F基因型可增加N K细胞表面的FcγRllla表达,从而进一步增强ADCC作用。法国成人淋巴瘤协作组的研究结果显示:只有过度表达Bcl-2的DLBCL患者才能从RTX治疗中获益,提示RTX还能通过克服Bcl-2介导的化疗耐药提高DLBCL患者的疗效M。vander Pol 等M在一项大规模的调查中发现FcγRlla的R/R型和FcγRllla的F/F 型、FcγRlla的H/H 型和FcγRllla的V/V型同时出现的频率明显升高,2个基因之间距离相近,提示这2个基因存在连锁不平衡(LD)现象,提示我们不能单独考虑单个基因的作用而要对LD现象进行综合析。由于作为遗传标志的SNP及LD现象在人体内非常稳定,有助于我们对可能影响药物作用各环节的基因多态性进行研究,在开始治疗之前,根据患者FcγR不同的基因型,预测患者接受RTX或免疫化疗的疗效及预后,将来,还可以应用基因共程对目标基因多态性进行靶点修饰,进行药物的设计与筛选,提高疗效、减少药物不良反应,最终实现个体化治疗。

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